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QIAfilter Plasmid Max Kit 收集100-250ml菌液中的菌体,碱裂解后细菌裂解物放入QIAfilter Cartridge中,几秒内过滤澄清,经预装的QIAGEN-tips依靠重力流流出,确保不会流干,减少了质粒制备的手工操作时间。然后将澄清的裂解物加入到含阴离子树脂的QIAGEN-tips,在适当的低盐缓存液和pH下选择性结合质粒DNA,通过中盐洗涤除去RNA、蛋白质、代谢物和其他低分子量杂质,并在高盐缓冲液中洗脱纯质粒DNA。洗脱所得DNA与异丙醇混合并用注射器装进QIAprecipitator中。经浓缩和脱盐后,直接从QIAprecipitator上用TE缓冲液或水洗脱DNA,收集高纯度高浓度(>1000ng/ul)的质粒DNA,产量可达到500ug,内毒素水平可降至1-10EU/ug。
QIAGEN-tips中独特的阴离子交换树脂专为核酸纯化而开发。
1)高纯:卓越的分离特性使DNA纯度等于或优于连续两轮CsCl梯度离心获得的DNA纯度。
2)手动操作时间短:澄清的裂解物经预装的QIAGEN-tip,通过重力流流出,永不干涸,最大限度地减少了质粒制备所需的手动操作时间, 且QIAfilter Cartridge快速澄清裂解物,比离心方法更简单快捷。
3)产量高:阴离子树脂的电荷密度远高于硅胶膜,与质粒的结合能力更强,反复过柱,可显著提高质粒DNA产量,性价比极高。
4)浓度高:异丙醇沉淀浓缩,质粒DNA达到1000ng/ul以上。
qiagen专利的LyseBlue试剂,确保最佳裂解和最大DNA产量, 该试剂盒也包含LyseBlue指示剂,用于指示最佳的缓冲液混合状态。通过简单的颜色变化,就可避免常见的手动操作失误,防止细胞裂解不充分及SDS、基因组DNA和细胞碎片沉淀不完全。这种独特的缓冲液添加剂确保了细胞充分裂解和完全中和,使产量最大化。
